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细胞因子ELISA试剂盒操作方法
1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1——10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。
2、加一定稀海报印刷释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
3、于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育分钟,洗涤时间等数据,最后一遍用DDW洗涤。
4、于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1m会使用到很多种工具l,37℃ 10——30分钟
5、于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
细胞因子ELISA试剂盒操作方法(二)
用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1、包数码打样被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1——10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2、加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.用左手抬起重锤1ml。37℃ 孵育0.5——1小时,洗涤。
4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10——30分钟。
5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依咖啡具据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
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